Случайна страница
За проекта
Полезни връзки
Последни публикации
Свържете се с нас
Автоматизация Автоматизация Архитектура Астрономия Одит Биология Счетоводство Военна наука Генетика География Геология Държавна къща Друга журналистика и средства за масова информация Изкуство Чужди езици Компютърни науки История Компютри Компютри Кулинарна култура Лексикология Литература Логика Маркетинг Математика Механика Механика Мениджмънт Метал и заваръчна механика Музика Население Образование Безопасност на живота Охрана на труда Педагогика Политика Право инструмент за програмиране производство Industries Психология P Дио Религия Източници Communication Социология на спорта стандартизация Строителство Технологии Търговия Туризъм Физика Физиология Философия Финанси Химически съоръжения Tsennoobrazovanie скициране Екология иконометрия Икономика Електроника Yurispundenktsiya

КУЛТУРЕН (БАКТЕРИОЛОГИЧЕН) МЕТОД НА ИЗСЛЕДВАНИЯТА

Прочетете още:
  1. А. Откриване на вирусни антигени в храчката чрез ELISA.
  2. Б. Основни принципи на изучаването на историята на етичните учения
  3. Г. Генетично конструиран метод
  4. Е. Метод, базиран на свойството на монотонност на експоненциална функция.
  5. FAST (техника за бързо анализиране на решения)
  6. Етап I Подготовка за развитието на гръдния тип дишане по традиционния метод
  7. I. 2.1. Графичен метод за решаване на проблема с LP
  8. I. 3.2. Метод с двоен симплекс.
  9. I. ГИМНАСТИКА, ТЕХНИТЕ ЗАДАЧИ И МЕТОДИЧНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ
  10. I. Имунология. Дефиниция, задачи, методи. История на развитието на имунологията.
  11. I. Личност като предмет на психологически изследвания
  12. I. Метод за разглеждане на остатъците от делене.

Бактериологичният метод за изследване (BLMI) е метод, който се основава на изолирането на чисти бактериални култури чрез култивиране върху хранителни среди и тяхната идентификация с вида на базата на изучаване на морфологичните, културните, биохимичните, генетичните, серологичните, биологичните, екологичните характеристики на микроорганизмите.

Бактериологичната диагностика на инфекциите се извършва чрез стандартни диагностични схеми, одобрени от Министерството на здравеопазването.

Чиста култура - бактерии от един вид, отглеждани на хранителна среда, чиито свойства са в процес на изучаване.

Щамът е идентифицирана чиста култура от микроорганизми от същия вид, изолирани от определен източник в определено време. Щамовете от един тип могат да се различават незначително от биохимични, генетични, серологични, биологични и други свойства, както и от мястото и времето на екскреция.

Цели на BLMI:

1. Изложение на етиологичната диагноза: изолиране на чиста култура от микроорганизми и нейната идентификация.

2. Определяне на допълнителни свойства, например чувствителността на микроорганизма към антибиотиците и бактериофагите.

3. Определяне броя на микроорганизмите (важни при диагностицирането на инфекции, причинени от UPM).

4. Типизиране на микроорганизми, т.е. идентифициране на различия между отделните видове въз основа на изследване на генетични и епидемиологични (фагови и серийни) маркери. Това се използва за епидемиологични цели, тъй като ни позволява да установим съвкупността от микроорганизми, изолирани от различни пациенти и от различни обекти на външната среда, в различни болници, географски региони.

BLMI включва няколко етапа, различни за аероби, факултативни анаероби и задължителни анаероби.

I. Етапи на BLMI за разпределение на чиста култура от аероби и факултативни анаеробни.

Stage.

A.Zabor, транспорт, съхранение, предварителна обработка на материала. Понякога, преди сеитбата се извършва селективно третиране на материала, като се вземат предвид свойствата на освободения микроорганизъм. Например, преди изследването на храчката или друг материал за наличието на киселинно устойчива Mycobacterium tuberculosis, материалът се третира с разтвори на киселини или основи.

Б. Посяване в среда за обогатяване (ако е необходимо) Провежда се, ако материалът съдържа малък брой бактерии, например при освобождаване на кръвната култура. За тази цел кръвта, взета при висока температура в голям обем (8-10 ml при възрастни, 4-5 ml при деца) се засява в средата в съотношение 1:10 (за преодоляване на ефектите на бактерицидни кръвни фактори); Растението се инкубира при температура 37 ° С в продължение на 18-24 часа.



Б. Микроскопия на тествания материал. От тестовия материал се приготвя смазка, оцветява се с грам или друг метод и се микроскопира. Оценете наличната микрофлора, нейното количество. В хода на по-нататъшни изследвания, микроорганизмите, присъстващи в първичния петна, трябва да бъдат изолирани.

Г. Сеене върху хранителни среди с цел получаване на изолирани колонии. Засадете материала с бримка или шпатула чрез механично отделяне върху чиния с диференциална диагностична или селективна среда, за да получите изолирани колонии. След инокулиране чашата се обърна надолу (за да се избегне размазване на колониите с капки от кондензационна течност), да се означи и да се постави в термостат при 37 ° С в продължение на 18-24 часа.

Трябва да се помни, че при засяване и повторно засаждане на микробните култури, вниманието на работника трябва да се обърне внимание на спазването на асептичните правила, за да се предотврати замърсяването на хранителните среди и да се предотврати замърсяване и самоинфекция!

В случай на инфекции, причинени от условно патогенни микроорганизми, където броят на микроорганизмите, присъстващи в патологичния материал, е важен, се прави количествено засяване на материала, при което в епруветки се приготвят 100 пъти разреждания на материала (обикновено 3 разреждания) в стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид. След това 50 μl от всяко разреждане се посяват върху хранителна среда в петриеви блюда.

Stage.

А. Изследване на морфотипове на колонии върху средата, тяхната микроскопия. Погледнете чашите и отбележете оптималната хранителна среда, скоростта на растеж, растежа на микроорганизмите. Да се ​​изследват избрани изолирани колонии, разположени по удар, по-близо до центъра. Ако се размножат няколко типа колонии - всеки се разглежда отделно. Оценявайте симптомите на колонии (Таблица 7). Ако е необходимо, сешоарите се сканират чрез лупа или с микроскоп с малка увеличителна леща и заострена диафрагма. Наблюдавани са тинторови свойства на различните морфотипове на колонии, за тази цел се приготвя смазка от частта на изследваната колония , оцветена с грам или други методи, микроскопична и определя морфологията на чистотата на културата. При необходимост поставете приблизително RA върху стъкло с поливалентни серуми.

‡ Зареждане ...

Б. Натрупване на чиста култура. За да се натрупа чиста култура, изолирани колонии от всички морфотипове се трансплантират в отделни епруветки със скосен агар или друга хранителна среда и се инкубират в термостат при + 37 ° С (тази температура е оптимална за повечето микроорганизми, но може да бъде друга, например, за Campylobacterium spp - + 42 ° С, Candida spp., И Yersinia pestis - + 25 ° С).

Като среда за натрупване на ентеробактерии обикновено се използва среда на Kligler.

Състав на Kligler среда: MPA, 0.1% глюкоза, 1% лактоза, сероводороден реагент (железен сулфат + натриев тиосулфат + натриев сулфит), фенолен червен индикатор. Първоначалният цвят на средата е червеникавочервен, средата е "скосен" в епруветките: има колона (2/3) и скосена повърхност (1/3).

Сетването на Kligler в сряда се извършва с удар върху повърхността и удар в колоната.

Stage.

А. Отчитане на растежа в средата на натрупване, оценка на чистотата на културата в Gram оцветяване. Те отразяват модела на растежа на изолираната чиста култура. Визуално чистата култура се характеризира с равномерно развитие. При микроскопично изследване на цветно оцветяване, приготвено от такава култура, в нея се откриват морфологично и тинтонично еднакви клетки в различни зрителни полета. Въпреки това, в случая на изразен плевроморфизъм, присъщ на някои видове бактерии, в петна от чиста култура, могат да се появят едновременно клетки с различни морфологии.

Ако средството за съхранение се използва като среда за съхранение, се оценяват промените в нейния цвят в колоната и скосената част, които определят биохимичните свойства: производство на глюкозна ферментация, производство на лактоза и сероводород. Когато лактозата се разлага, наклонената част на средата става жълта, докато глюкозата се разлага, колоната става жълта. Когато се образува СО 2 по време на разлагането на захари, газови мехурчета или празнина във формата на колоната. В случай на производство на сероводород, по време на инжектирането се получава почерняване поради превръщането на железен сулфат в сулфид на желязо.

Характерът на промяната в цвета на средата Kligler (Фигура 23) се обяснява с неравномерния интензитет на разграждане на азотни вещества от микроорганизми и образуването на алкални продукти в аеробни условия (наклонена повърхност) и анаеробни условия (в колона).

При аеробни условия се наблюдава по-интензивна алкализация на наклонената повърхност, отколкото в колоната на средата. Следователно, разграждането на глюкозата, присъстващо в среда в малко количество, киселината, образувана върху наклонената повърхност, бързо се неутрализира. В същото време, когато се разлага лактозата, която присъства в средата във висока концентрация, алкалните продукти не могат да неутрализират киселината.

При анаеробни условия в колоната алкалните продукти се образуват в незначително количество, така че тук се открива ферментация на глюкоза.


Фиг. 23. Индикаторна среда на Kligler:

1 - първоначално,

2 - с растежа на Е. coli,

3 - с растежа на S. paratyphi В,

4 с увеличаване на S. typhi


Е. coli разгражда глюкозата и лактозата чрез газиране, не произвеждат сероводород. Те причиняват пожълтяване на колоната и скосената част със средни разкъсвания.

S. paratyphi разграждат глюкозата с газиране, лактоза-отрицателна. Те причиняват пожълтяване на колоната със сълзи, наклонената част не променя цвета и остава пурпурна. В този случай S. paratyphi B произвежда сероводород (при инжектирането се появява черен цвят), S. paratyphi A не произвежда сероводород.

S. typhi разграждат глюкозата без газиране, лактоза-отрицателна, произвеждат сероводород. Те причиняват пожълтяване на колоната без разкъсвания, наклонената част не променя цвета си и остава пурпурна, в хода на инжектирането се появява черен цвят.

Shigella spp. Глюкоза-положителни, лактоза-отрицателни, не произвеждат сероводород. Те причиняват пожълтяване на колоната (със или без прекъсвания, в зависимост от серовата), скосената част не променя цвета и остава пурпурна.

Б. Окончателна идентификация на чистата култура (определяне на систематичната позиция на изолирания микроорганизъм до нивото на вида или варианта) и определяне на спектъра на чувствителност на изолираната култура към антибиотици.

За да се идентифицира чистата култура на този етап, изследвайте биохимични, генетични, серологични и биологични признаци (Таблица 8).

При рутинната лабораторна практика, когато се идентифицира, няма нужда да се изследват всички свойства. Използване на информативни, достъпни, прости тестове, достатъчни за определяне на вида (варианта) принадлежност на изолирания микроорганизъм.

Таблица 8


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 |


Когато използвате този материал, свържете се със bseen2.biz (0.081 сек.)