Автоматизация Автоматизация Архитектура Астрономия Одит Биология Счетоводство Военна наука Генетика География Геология Държавна къща Друга журналистика и средства за масова информация Изкуство Чужди езици Компютърни науки История Компютри Компютри Кулинарна култура Лексикология Литература Логика Маркетинг Математика Механика Механика Мениджмънт Метал и заваръчна механика Музика Население Образование Безопасност на живота Охрана на труда Педагогика Политика Право инструмент за програмиране производство Industries Психология P Дио Религия Източници Communication Социология на спорта стандартизация Строителство Технологии Търговия Туризъм Физика Физиология Философия Финанси Химически съоръжения Tsennoobrazovanie скициране Екология иконометрия Икономика Електроника Yurispundenktsiya

Последователни стъпки

Прочетете още:
  1. I. Подготвителни етапи
  2. I. ЕТАПИ НА КОНФЛИКАТА
  3. I. Етапи на развитие на бронхиална астма
  4. I.3. Основните етапи на историческото развитие на римското право
  5. II. Организация и етапи на статистическите изследвания
  6. II. ОСНОВНИ ЕТАПИ НА ФАРМАЦЕВТИЧЕН АНАЛИЗ
  7. II. Етапи на управлението на Александър І
  8. Автоматично генериране на писмен текст: определение, етапи, обща структура на системата за генериране
  9. Acmeism като литературно училище. Основни етапи. Естетика, философски източници. Манифести.
  10. Антропогенеза: биологични и социални предпоставки за човешката еволюция, фактори и етапи на неговото развитие; раса, начини за тяхното формиране.
  11. Белоруска етносоциална общност: същност, етапи на развитие
  12. Сравнителен анализ: същност, видове, етапи

1. Провеждане на PCR. Тя позволява да се получат множество копия на малки ДНК фрагменти от 300 до 1000 нуклеотиди по размер. Последователността на големи фрагменти е трудна, тъй като по време на тяхната електрофореза е невъзможно да се открият фрагменти, които се различават в един нуклеотид.

2. Пречистване на амплифицирани ДНК фрагменти. Ампликоните се пречистват от шлаките - остатъците от PCR реакцията (праймери, несвързани нуклеотиди).

3. Секвениране. Провеждат се серия от последователни етапи (Фигура 38):

а) получаване на реакционна смес, която включва:

- изследваната ДНК,

- грунд,

- ДНК полимераза и буфер за него,

- деоксинуклеотид трифосфати (dATP, dTTP, dGTP, dCTP),

- дидеоксинуклеотиди, белязани с флуоресцентен маркер, които прекратяват синтезата на ДНК веригата, тъй като им липсва 3'-ОН групата, необходима за образуването на мост между два нуклеотида;

b) извършване на PCR-последователна реакция;


Фиг. 38. Стъпки на последователност

1. Чрез PCR се получават множество копия от изследвания ген, чийто размер не трябва да надвишава 1000 bp. Ампликоните, образувани в PCR, се откриват чрез електрофореза. 2. Амплионите се пречистват от PCR шлаки (праймери, нуклеотиди).


3а, b. С помощта на флуоресцентно обозначени терминатори на синтезата на ДНК веригата се получават много ДНК фрагменти, чийто синтез се прекъсва върху аденин, тимин, гуанин, цитозин. Броят на получените ДНК фрагменти е равен на сумата от А, Т, G, С, присъстващи в секвенсирания фрагмент. 3в. Електрофорезата се извършва в денатуриращ полиакриламиден гел, в който са разделени ДНК фрагменти, които са различни в един нуклеотид.
A CG T A C T G T 1 1 1 1 2 2 2 2 Проба 1 Проба 2



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 |


Когато използвате материала, поставете връзка към bseen2.biz (25.749 сек.)