Други Авто Автоматизация Архитектура Астрономия Аудит Биология Бухгалтерия Военное дело Генетика География геология Государство Дом Другое Журналистика AraabMuzik СМИ Изобретательство Иностранные Луи Антъни Информатика Искусство Featured Компьютеры Кулинария Культура Лексикология Литература Логика Маркетинг Математика Машиностроение Медицина Менеджмент Металлы AraabMuzik Сварка Механика Kulemina население Образование инсталации Охрана безопасности Werbeagentur инсталации Охрана ТРУДА Педагогика Политиката Qualité Право Приборостроение Программирование Производство Industrija Психология Р дио Регилия Связь Социология Спорт Стандартизация строительство Технологии Торговля туризм Физика Физиология Философия Финансы Химия Хозяйство Ценнообразование Черчение Экология Эконометрика Экономика Электроника Юриспунденкция

Етапы молекулярно-генетических исследований

Читайте также:
  1. I. Подготовительные этапы
  2. I. ЭТАПЫ ПРОТЕКАНИЯ КОНФЛИКТА
  3. I. Етапы развития бронхиальной астмы
  4. I.3. Основна история на развитието на римско право
  5. II. Организация и статистически данни
  6. II. ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОО АНАЛИЗА
  7. II. Этапы правления Александра I
  8. Автоматическое порождение писмен текст: определение, съдържание, общи структура системы порождения
  9. Акмеизм като литературная школа. Основни въпроси. Эстетика, философские источники. Манифесты.
  10. Антропогенез: биологични и социални предпоставки за извличане на хора, фактори и етапси его эволюции; расы, пути их формирования.
  11. Аппаратура для научных исследований.
  12. Белорусская этнисоциальная общность: суинтеь, этапы развития

1.Взятие материал, маркировка, транспортиране, подготовка за изпитване, хранене.

2. Экстракция ДНК / РНК.

3. Проведение молекулярно-генетических исследование.

4. Анализ и интерпретация на резултатите, в заключенията.

Оценка молекулярно-генетических методов. Преимущества: Высокая специфичность.Высокая чувствительность.Позволяют выявлять МО, присутствующие дори в небольшом количестве. Не се колебайте да деактивирате търсенето на информация и използване, оптимизиране на търсещите машини, изтегляне на софтуера за автоматизация, оптимизиране на търсачките и софтуер за отстраняване на неизправности. Возможность использования для экспресс-диагностики.Возможность полной автоматизация и высокая производительность. Низкая вероятность инфицирования персонала в процеса на провеждане исследване.

Недостатъчки: Отхвърляне на международни протоколи за молекулярно-генетични диагностика на различни нозологични форми на заболеваемост. Необходимость разработки на нови приходови клинични интерпретации получаемых результатов. Высокая стоимость оборудования.

I. Молекулярная гибридизация - - м олекулярно-биологическая техника, основанная на способности одноцепочечной молекулы изучаемой ДНК / РНК специфически соединяться с комплементарными одноцепочечными зондами (молекулами-свидетелями) с образованием гибридных дуплексов, которые флюоресцируют или меняют цвет реакционной смеси.

Наименование метод: выяние степени сходства различен ДНК. Для идентификации МО, особено техническо, трудно и медленно растение (микоплазми, Хламидии Вирусы)

Материал для исследования: гной; кровь; отделяемое уретры: моча, испражнеи, биопонктаты тканей и органов: объекты окружающей среды. Методы гибридизации: Врастворе. В тканевых срезах (на място). Не се допускат депарафинирутт, демаскирутт НК в них и нанос гибридизационный раствор. На микрочипах (эррей гибридизация) - наболее совершенный метод. Позволявате да поставите и фиксирате до некомпетентно число ДНК-зондов на порхность стеклянного чипа, което позволява да изпробвате одновременно всички гени. На мембранах.

Этапы:

1. Выделение ДНК.

2. Полученият материал е фрагментов изучаемой ДНК (не от 5000 до 10000 н.о.). Проводят либо рестрикцию крупной молекулы ДНК, либо ПЗР с образование небольших ампликонов, либо обработку УЗ.



3. Название ДНК на мембрану и фиксация ДНК на мембране:

1) дот-блоты или слот-блоты.Перед нанесением ДНК денатурируют - превращайт в 1-цепочечные. Зарем небольшие фрагменты изучаемой ДНК нанос на мембраната във виде точек (дот-блоты), либо полосок (слот-блоты).

2) саузерн-блоты.Небольшие фрагменты изучаемой ДНК предварително се разделя на електролизма в полиакриламидом геле. ДНК переносят из геля на поверхность мембран. Перенесенную на мембрану ДНК фиксируют при 80 0 С или УФ свят.

4. Гибридизацияпроводится в несколько этапов: обработка предхибридизационным буфером мембраны с ДНК, което увеличава вашите связывающую способность мембраны; приготвяне на гибридизационного растери, содержатель буфер и меченый зонд; программирование гибридизационной камери и провеждане на гибридизации при 65 0 С.

5. Анализ результатов. Искате ли да направите грешка?

II. ПЦР (полимеразная цепная реакция) - способ быстрого получения множественных копий специфической последовательности ДНК бактерий , грибов, вирусов до количество, достаточного для идентификации другими молекулярно-биологическими методами Назначение: индикация МО в объектах внешней среды, пищевых продуктов, материале от больных, идентификация, генетическое типирование, выявление генов вирулентности. Материал для исследования тот же.

Принцип ПЦР. След това температурно денотурираните двукомпонентни ДНК образуват отделни молекули, които не съдържат олигонуклеотиди - праймери. Праймерс присъединяюттся только комплементарному участку ДНК на обоих отпред ДНК и ограничававют амплифицируемый фрагмент с двах сторон. К 3'концу праймера прикрепляется ДНК-полимераза и на ДНК матрица синтезирует копию. Синтез ДНК протекает только между праймерами.

Постановка ПЦРпроводится в 5 этапов.

1. Выделение ДНК из клеток.

2. Приготвяне реакционной смеси . В микроцентрофужния разтвор се използва смес от 0,5 или 0,2 мл смеси от реакционни смеси, които съдържат 25, 50 или 100 микролитра реакционна смес.

‡ агрузка ...

Обязательные компоненты реакционной смеси:

а) раствор искмой ДНК;

б) смесване на четырёх дНТФ - строительный материал ДНК;

в) термостабильная ДНК-полимераза-Taq-полимераза (ненатрапчива при 96 0 С), оущественляющая полимеризацию нуклеотидов; ее получаватт от Termophilus aquaticus;

г) 2 синтетични праймера (прямо и обратный) - короткие, от 15 до 30 основи, 1-целочислени олигонуклеотиди, които са комбинирани със структурни структури и DNA;

д) специфический буфер. Для функциональности Так-полимеразни нужди от Mg +2 , определеното значение рН и концентрации солей.

3. Программирование температурного цикла и провеждане на амплификации зададен фрагмента ДНК в термоциклере. 1) Начальная денатурация 90-95 0 С, 3-10 мин. 2) 25-40 циклон: Денатурация 90-95 0 С, 25сек-1мин, Отражения 48-65 0 С, 25сек-4мин, Елонгация 72 0 С, 25сек-4мин. 3. Конечная элонгация 72 0 С, 5-10 мин- образуются дуплексы ДНК. Хранение - 4 0 С.

4. Преглед на получените копия на ДНК и регистриране на резултиращите реакции. Електрофореза в агорозов геле, содержащам флюорезцирующий в УФ-свете ДНК-краситель - бромид этидия.

5. Анализ и интерпретация на резултата от реакциите. Резултатите от изследването показват, че те са полезни и са толкова полезни, че имат положителни и отрицателни контроли.

Экология микроорганизмов. Экологические понятия. Типы экологических связей микроорганизмов. Роль микроорганизмов в возникновени и развити биосфери (концепция микробной доминанты). Распространение на микроорганизми в природата.

Важнейшим объектом изучения экологичний микробиологии является микробиоценоз. В естественных средах (почва, вода, воздух, живые организмы) микроорганизмы живут в виде сообществ, образуя экологические связи как между собой, так и с растениями, животными и человеком, а также с абиогенными факторами окружающей среды

Нейтрализм - форма межвидовых отношений, при которо население в един биологичен популации не оказва друг на друг ни стимулирующего, ни подавляющего действия.

При симбиозата на популяции извлекают за сейбра пользу. Степень взаимозависимости симбионтов варьирует от слабой (сотрудничество) до полной (мутуализм).

Извършва се наблюдение в техническата ситуация, като се използват други функции на други жизнени функции. Трябва да започнете работа с PowerPoint, за да я видите най-добре за други популяции. Симбиоз наблюдение между аеробни и анаеробни, организми човек и его собственной (аутохтонной) микрофлорой.

Коментари: 0 Коментари: 0 Рейтинг: 0 Рейтинг: 0 Рейтинг: 0 Рейтинг: 0 Рейтинг: 0 Рейтинг: Уверете се, че се възползвате максимално от парите и парите си, печелите пари от бизнеса си или от бизнеса си.

При конкуренции или антагонизме, проживяването на жизнеделательности одной популяции другой. Антагонисты обладают способностью выделять в следующие вещесы, которые вызывают зарадку размножение или гибель компонента микробиоза. Ктаким веществам по отношение на антибиотиците, бактериоцинските, органичните и жирните кислоти и др.

Паразитизм - такой вид междидовых связей, при котором одна популяция (паразит), нанасяне на други популяции (хозяйну), извлекайтет за себя пользу. Паразитами бактерий являются фаги. Кмикробам-паразитам человека се отнася за бактерии, вируси, гриби, простейшие.

Основно положение в областта на микроорганизмите - концепция о доминирование

МО в созданите биосфери и е жизнедетельности ( концепция микробной доминанты )

Количество биомассы прокариотов в природных субстратах планеты - 74.5 млрд. т.

других «живых» организмов - 57,05 :

- 55,0 - растения

- 0.55 - животные

- 1.5 - водоросли и простейшие

Аутохтонная микрофлора кожи, ротовой полости, дхахальных путей, желеодочно-кишечниго третрата, мокеполовой системы, етно значение и методы изучения. Дисмикробиоз: причини, последици, профилактика, принципни коррекции. Гнотобиология.

Методы изучения нормальной микрофлоры:

I. Бактериологический. Самостоятелно значение за биотоповете, в които се обитава болшинството от разнообразни МО - полость рта, кишечника, вагины, дает общее представление а микробах.

II. Бактериологический. для биотопов с широк спектром МО - полость рта, кишечника, вагины. Основни принципи на бактериологичните методи

1. Использование качеств и количественной оценки микрофлоры

2. Первичный посев материална без обогащения.

3. Изискуване большого набора питательных сред, подбор условия культивирования

С современных позиций, нормальную микрофлору следует рассматривать как совокупность множества микробиоценозов, определенным видовым составом характеризующихся и занимающих тот ИЛИ иной биотип в организме .

Нормальная микрофлора подчиняется росду основна нормамерностей:

она достаточно стабильна;

• образува биопленку, толщина которо колеблется от 0,1 до 0,5 мм.

• представителни несколькими видами, средни котировки за доминантни видове и вид-наполнители;

• преобладающими являются анаэробные бактерии.

Биопленката представлява собствен полизахариден каркас, съдържащ микробна полизахарида и муцина, който произвежда клетъчни макроорганизми. В родния си град имате недвижим имот - представителей нормальной микрофлоры, которые могут располагаться в несколько слоев.

Не можете да използвате микрофони, които можете да използвате, и можете да ги използвате като резервно устройство, което се използва от много смартфони като част от 10: 1-100: 1.

Заселение бактериями различно място тела начинается в момент рождения човек и продолжается на протяжении всей его жизни.

Качественного и количественного Формирование состава нормальной микрофлоры регулируется сложными антагонистическими и синергическими отношениями Между отдельными ее представителями в составе биоценозов .

Состав транзиторной микрофлор може да се промени в зависимост:

• от возраста;

• условией внешней среды;

• условие, труда, рациона питания;

• перенесенных заболеваний;

• травм и стрессовых ситуаций.

В составе нормальной микрофлоры различают :

постоянно, или резидентно микрофлору, - представително относително стабилно солаво МО, обобщено обновяюваемых в определителен член определителен член определителен член тела човек в определителен член краен определителен член возраста;

транзиторную, или временную микрофлору, - попадане на кожу или слизистки оболочки в окружающей среди, които не са изчерпани и обитават постоянно на порхностях тела человека. Она представилена сапрофитны условно-патогенными МО, които обитават кози или слизистки оболочка в течение нескольких часов, дней или недель. Присутствие транзиторной микрофлоры определяется не только поступлением МО из окружающей среды, но и состоянием иммунной системы организма хозяина и составом постоянной нормальной микрофлоры.

Стерильны:

• внутренние органы;

• головной и спинной мозг;

• альвеолы ​​легких;

• внутреннее и среднее ухо;

• кровь, лимфа, спинномозговая жидкость;

• матка, почета, мокети и мочо в мочевом пузыре.

Наиболее богаты микроорганизмами :

• ротовая полость;

• толстый хишечник;

• верхние отделы дыхательной системы;

• наружные отделы мочеполовой системы;

• кожа, особенно е волосистая часть.


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 |


При использовании материала, поставете ссылку на Студалл.Огг (0.09 сек.)